甲基化实验

今天运困体育就给我们广大朋友来聊聊山西甲基化研究,希望能帮助到您找到想要的答案。

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• 1、甲基化实验室用什么方法？
• 2、蛋白质甲基化检测常用方法？
• 3、基因甲基化实验需要把c变成t吗
• 4、“黄金鼠饼了解一下？” --------有意思的DNA甲基化现象

甲基化实验室用什么方法？

优质回答1）硫酸二甲酯，(CH3)2SO4

硫酸二甲酯很便宜，因此是工业上用的最多的甲基化试剂。缺点是毒性比较强。

（2）碘甲烷，CH3I

碘甲烷在实验室中比较常用，由于其沸点很低，所以反应后过量的碘甲烷很容易通过旋蒸除去。碘甲烷比较昂贵，而且毒性也较强。

（3）硫酸衍生物酯类，比如对甲苯磺酸甲酯CH3OTs，三氟甲磺酸甲酯CH3OTf。

这类物质也是实验室常用的甲基化试剂，由于其常温下的蒸汽压很小，所以不易挥发，对人体毒害小一些。缺点还是成本比较高。

蛋白质甲基化检测常用方法？

优质回答蛋白质甲基化检测是研究蛋白质表观遗传修饰的一种重要方法之一。以下是常用的蛋白质甲基化检测方法：

1、免疫印迹（Western blotting）：使用特异性抗体结合甲基化蛋白质，在蛋白质电泳分离后进行检测。可以通过对不同样品的比较来定量甲基化水平。

2、免疫组织化学（IHC）：在组织切片上使用特异性抗体标记甲基化蛋白质，通过显色反应来可视化甲基化的位置和强度。

3、免疫共沉淀（Co-IP）：利用特异性抗体将甲基化蛋白质与其互作的蛋白质一起结合，然后使用Western blotting等方法检测共沉淀的蛋白质。

4、质谱法（MS）：通过质谱分析技术对蛋白质进行定性和定量检测。可以通过氨基酸残基的质量变化来判断是否发生了甲基化修饰。

5、甲基化特异性PCR（MSP）：利用特异性引物扩增甲基化或非甲基化的DNA序列，结合凝胶电泳分析来判断目标基因是否发生了甲基化。

蛋白质甲基化

这些方法可以单独或联合使用，根据实验目的和样品类型的不同选择合适的方法进行蛋白质甲基化检测。

基因甲基化实验需要把c变成t吗

优质回答基因甲基化实验需要把c变成t

DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一，大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。

在甲基转移酶的催化下，DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形成5－甲基胞嘧啶，这常见于基因的5'-CG-3'序列。大多数脊椎动物基因组DNA都有少量的甲基化胞嘧啶，主要集中在基因5’端的非编码区，并成簇存在。甲基化位点可随DNA的复制而遗传，因为DNA复制后，甲基化酶可将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。

DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鸟嘌呤（7-mG）

结构基因含有很多CpG 结构, 2CpG 和2GPC 中两个胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且两个甲基集团在DNA 双链大沟中呈特定三维结构。基因组中60%～ 90% 的CpG 都被甲基化, 未甲基化的CpG 成簇地组成CpG 岛, 位于结构基因启动子的核心序列和转录起始点。有实验证明超甲基化阻遏转录的进行。DNA 甲基化可引起基因组中相应区域染色质结构变化, 使DNA 失去核酶ö限制性内切酶的切割位点, 以及DNA 酶的敏感位点, 使染色质高度螺旋化, 凝缩成团, 失去转录活性。5 位C 甲基化的胞嘧啶脱氨基生成胸腺嘧啶, 由此可能导致基因置换突变, 发生碱基错配: T2G, 如果在细胞分裂过程中不被纠正,就会诱发遗传病或癌症, 而且, 生物体甲基化的方式是稳定的, 可遗传的。

DNA 甲基转移酶有两种: 1) DNM T1, 持续性DNA 甲基转移酶—— 作用于仅有一条链甲基化的DNA 双链, 使其完全甲基化, 可参与DNA 复制双链中的新合成链的甲基化,DNM T1 可能直接与HDAC (组蛋白去乙酰基转移酶) 联合作用阻断转录; 2)DNM T3a、DNM T3b从头甲基转移酶, 它们可甲基化CpG, 使其半甲基化, 继而全甲基化。从头甲基转移酶可能参与细胞生长分化调控, 其中DNM T3b在肿瘤基因甲基化中起重要作用。

DNA 去甲基化有两种方式: 1) 被动途径: 由于核因子N F 粘附甲基化的DNA , 使粘附点附近的DNA不能被完全甲基化, 从而阻断DNM T1 的作用; 2) 主动途径: 是由去甲基酶的作用, 将甲基集团移去的过程。在DNA 甲基化阻遏基因表达的过程中, 甲基化CpG 粘附蛋白起着重要作用。虽然甲基化DNA 可直接作用于甲基化敏感转录因子E2F、CREB、A P2、CM ycöM yn、N F2KB、Cmyb、Ets, 使它们失去结合DNA 的功能从而阻断转录, 但是, 甲基化CpG 粘附分子可作用于甲基化非敏感转录因子(SP1、CTF、YY1) , 使它们失活, 从而阻断转录。人们已发现5 种带有恒定的甲基化DNA 结合域(MBD ) 的甲基化CpG 粘附蛋白。其中M ECP2、MBD1、

MBD2、MBD3 参与甲基化有关的转录阻遏;MBD1 有糖基转移酶活性, 可将T 从错配碱基对TöG 中移去,MBD4 基因的突变还与线粒体不稳定的肿瘤发生有关。在MBD2 缺陷的小鼠细胞中, 不含M ECP1 复合物, 不能有效阻止甲基化基因的表达。这表明甲基化CpG 粘附蛋白在DNA 甲基化方式的选择, 以及DNA 甲基化与组蛋白去乙酰化、染色质重组相互联系中的有重要作用。

“黄金鼠饼了解一下？” --------有意思的DNA甲基化现象

优质回答  在生命科学的发展中，模式动物有着巨大的贡献，说起萌萌哒的模式动物，你的第一反应是什么？是传说中的实验小白鼠吗？

  1： Agouti 基因是一些哺乳动物的毛色基因的控制基因，控制的毛色为“鼠灰色”。正常情况下，啮齿类动物的 Agouti 基因表达在皮肤的毛囊中，因此， Agouti 基因的表达直接影响了皮毛的颜色。此外， Agouti 基因表达产物和许多代谢相关的重要受体相互作用， Agouti 的基因表达情况与能量代谢，肥胖，二型糖尿病，肿瘤的发生等相关。

  2： Agouti 基因有很多显性、隐形等位基因。比如说，隐性等位基因a（nonagouti）,是 Agouti 基因突变而来，不具有表达Agouti信号蛋白的能力，如果说是a/a型的小鼠，皮毛是纯黑色的。A y （lethal yellow）是一个致死的突变基因。杂合的小鼠皮毛是黄色的，而且体型非常的“肥大”

A y （viable yellow）含有自带启动子的反转座子（可以理解为“跳跳基因”，非常的不安分，会在基因上跳来跳去）IAP（intracisternal A particle retrotransponson）的插入，导致了小鼠的Agouti基因过表达。从而引起小鼠的皮毛呈现黄色，并且会使小鼠出现肥胖等症状。（图三简直就是“黄金鼠饼”呀！）

  3： 并不是基因相同表型就会相同。 有时候基因完全一样，表型不一定会完全一样，这都要从表观遗传上找找原因。表观遗传的改变包括了DNA甲基化，组蛋白修饰，非编码RNA等。我们都知道DNA是由4个碱基---A,T,C,G构成的。DNA甲基化（接下来会了解到的）是指C（胞嘧啶）上多了一个化学修饰而已，这个化学修饰就是胞嘧啶上多挂了一个甲基（DNA甲基化可以发生在腺嘌呤的N-6位、鸟嘌呤的N-7位、胞嘧啶的C-5位等。但在哺乳动物中DNA甲基化主要发生在5’-CpG-3’的C上生成5-甲基胞嘧啶(5mC)，此处感谢的指正@ theViru ）。 DNA发生甲基化修饰之后，可能导致基因的高表达或者是低表达。

  回到之前提出的猜想问题，除了 Agouti 基因以外， 是不是个体的基因背景差异也会导致这种肥胖基因的出现呢 ？ 为了解决这个问题，科学家们采取了“非常”手段， 让含有该突变的小鼠和同类系的小鼠近200代的近亲繁殖和强制性的杂合交配 ，得到的后代小鼠基本上没有任何遗传差异。

  Waterland博士和Dolinoy博士他们几乎没有遗传和表观的差异的A y /a怀孕小鼠，分成2组，一组的饲料添加了VC,胆碱，叶酸，甜菜碱等可以促进DNA甲基化的食物，另一组则是正常的饮食，结果发现，喂有甲基化的饲料的组，小鼠出生后的皮毛表型颜色各异。进过研究发现，IAP的启动子区域甲基化程度升高，导致了Agouti的基因沉默表达，小鼠的皮毛出现了偏棕色，IAP的启动子甲基化的程度不同，小鼠的颜色也不同，但是它们的基因型都是一样的。 这一结果显示，在母亲怀孕期间，通过饮食对表观遗传的修饰可以影响后代的表型 。

  人的 Agouti 基因也已经被找到了。主要表达在脂肪，睾丸，卵巢等地方。我们都知道孕妇在怀孕之初会不充叶酸等营养物质。而人类也有 Agouti 基因，为什么人类的毛色没有什么差异呢？ Agouti 基因不在人的毛囊中表达， 且与毛发着色没有什么关系。

  此外，在日常生活中，“奇趣”生物现象，比如说：生着生着没墨的小猫，还有着“十只橘猫九只胖，还有一只压倒炕”的橘喵。难到自带“土豪色”的小动物，都受这种神奇基因的影响嘛？（虽然之前介绍过Agouti基因表达有影响代谢的能力）

  但是，但是，但是！还未有科学依据显现这些有意思的生物表型和表观有关系，这些现象会让人不禁好奇的问：这些和 Agouti 基因相关嘛？和表观遗传学相关嘛？

  这些奇趣的生物学现象具体的机制，会随着今后的研究得到解释，此外还有很多未知的有意思的现象在等待探索和发现。

1;Dolinoy D C, Weidman J R, Waterland R A, et al. Maternal genistein alters coat color and protects Avy mouse offspring from obesity by modifying the fetal epigenome.[J]. Environmental Health Perspectives, 2006, 114(4):567-572.

2:Rosenfeld C S, Sieli P T, Warzak D A, et al. Maternal exposure to bisphenol A and genistein has minimal effect on A(vy)/a offspring coat color but favors birth of agouti over nonagouti mice[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 2013, 110(2):537-542.

3:杨云青, 高丹玫, 郭宗圣. Agouti和Agouti相关蛋白的一些生物学内涵[J]. 动物学杂志, 2008, 43(5):144-152.

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